Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病症状进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来胰脏自身病原体到显现出来1HG心血管疾病药理学病因的的发展率在学龄前初就有很好的详细描述，多个胰脏自身病原体非典HG的学龄前中所有70%在血清转化后10年内患病心血管疾病，而随访15年的学龄前这一百分比减寡到84%。相比之下之下，分之一药理学1HG心血管疾病一半以上的HG1HG心血管疾病的得病机制还没给与充分的学术研究。

越来越多的人开始运用于有该系统该系统来定义1HG心血管疾病的的发展：生殖在显现出来多种胰脏自身病原体时进入第1阶段性，显现出来血压异常时进入第2阶段性，显现出来病因时进入第3阶段性。一些多发胰脏自身病原体非典HG的生殖，在1期和2期，的发展较慢，并发展为得病的1HG心血管疾病。我们之前详细描述了一分组在首次探测到多种胰脏自身病原体结果显示后至寡10年无心血管疾病的总括慢的发展者，这分组病因人数寡，但特征非常完全一致。随后，我们推测胰脏自身上皮细胞特异性CD8+T细胞核质兄化在的发展减慢的病因中所必需不则有，但在同类型得病和长期则有的心血管疾病病因中所很容易探测到。这有可能表明，与的发展病因相比之下，这些病因免疫质兄化的调节提高。

中期学术研究表明，尽管调节性T细胞核(Treg)数量正常，但心血管疾病病因则有一些机能缺陷，其中所包括对IL-2的质兄化能力增加。此外，心血管疾病病因中所的波动CD4+T细胞核有可能对调节兼具抵抗性，表现为波动T细胞核的依赖性增强，自然诱发的Treg和体外诱发的抑制Treg，以及上皮细胞随之而来的CD4+T细胞核中所IL-2质兄化增强。本学术研究的目的是详细描述了CD4+调节性T细胞核(Treg)在这群人总括减慢的发展者中所的特征，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX学术研究是一项以人群为基础的斜向学术研究，在21岁不限确诊的病因亲属中所检测1HG心血管疾病的危险因素。我们之前详细描述了长期减慢的发展者的特征，他们持续保持多重胰脏自身病原体非典HG大约10年，但没显现出来心血管疾病的药理学病因，慢性或非展开性免疫。随后，10名此后持续保持无心血管疾病并想要提供大量体液结果显示的减慢的发展者纳入T和B细胞核机能分析。在目前的学术研究中所，8名慢的发展者(SP分组)，中所位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰脏自身病原体非典HG。所有的参加者都始终持续保持1HG心血管疾病的发展的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身病原体对某些上皮细胞的非典HG质兄化，然而，一名病因已经始终持续保持2期至寡6年，但没显现出来药理学病因，一名病因被诊断为心血管疾病，该科学实验者72岁，在采集科学实验结果显示时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在学术研究小分组中所对该酪氨酸展开了单独评估。剥离外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多实例流式细胞核术和T细胞核依赖性试验评估酪氨酸中所Treg的基频、表HG和机能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类检验、比如说和转回)展开无统筹聚类分析，评估Treg表HG。

结果：与健康酪氨酸相比之下，来自慢的发展体的知觉CD4+T细胞核的统筹聚类标示出，应答命的知觉CD4+ Treg基频减寡，与持续性抑制的TNFR相关酶(GITR)隐含减寡有关。一名HbA1c升高的病因与的发展减慢者和最简单的相比较分组相比之下，Treg谱大同小异。机能分析表明，与健康酪氨酸相比之下，来自减慢的发展体的Treg介导的CD4+波动T细胞核依赖性相比受损。表现为对波动CD4+T细胞核CD25和CD134隐含的依赖性减寡。

平面图1 险恶的表HG分析标示出，CD4+Treg亚HG在慢的发展配置文件中所减寡。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有酪氨酸的活命CD4+CD45RA -细胞核上。根据标识物隐含检验出10个元簇:知觉T细胞核_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T细胞核;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核;文件该系统Treg_1;文件该系统Treg_2;文件该系统Treg_3;和文件该系统Treg_4。(a)运用于9个并不相同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个节点都有一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在节点分组周围装裱。每个节点中所的年糕平面图说明单个标识的隐含级别。(b)每个元聚类的热平面图，以标示出整体标识隐含。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的基岩。(e-l)比起丰度为每个metacluster筒该线平面图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:文件该系统Treg_2 (e),文件该系统Treg_3 (f),文件该系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T细胞核(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T细胞核(l)。橘色白点都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 运用于CITRUS的预测模HG断定，Treg基频的减寡是的发展减慢的字样。分级去极化(a - f)和水果分析(g-k)比较SP参加者和最简单的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群体的传奇色彩平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含展开剥离，模拟FlowSOM社会群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及酪氨酸SP 606(橘色)中所CD25+ cd127的基频统计平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化有界的筒该线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(文件该系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件该系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件该系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件该系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含数值填充，箭头突出的簇被识别为SP和HD配置文件之间的并不相同。(j)筒该线平面图标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组中所，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的比起丰度(百分比)。(k)直方平面图标示出每个簇的表HG(粉色)和Treg标识比起隐含与背景隐含(黄色);上列，文件该系统Treg_3;下面偷偷地，文件该系统Treg_4。背景与所有其他簇中所标识的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图3 与健康献血者相比之下，的发展减慢者知觉treg的GITR减寡。每个知觉CD4+T细胞核元簇(知觉T细胞核_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T细胞核;HLA-DR + GITR +知觉T细胞核;文件该系统Treg_2;文件该系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个隐含标识的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的隐含热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR隐含串联，标示出直方平面图(c)和统计平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(黄色)酪氨酸SP 606和最简单的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR隐含，从分级去极化，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(橘色)串联，标示出直方平面图(e)和统计平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图4 来自减慢的发展的CD4+ treg细胞核控制波动CD4+T细胞核的能力增加。SP分组用黄色的该线和白点说明，HD分组用黑色的该线和白点说明，橘色的该线/白点说明酪氨酸sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标识为CFSE, Treg按观察的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠抑制细胞核，培育出3在此之后展开流式细胞核术探测。(a-d)与CD4+这样的话者比起应的treg培育出(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培育出。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE依赖性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百分比。运用于非典HG相比较(应答命的鼓动细胞核包含treg)计算依赖性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 波动CD4+T细胞核对减慢的发展的T细胞核抑制的依赖性更适合于。SP分组用黄色的该线和白点说明，HD分组用黑色的该线和白点说明，橘色的该线/白点说明酪氨酸sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标识，treg按观察的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠抑制细胞核，培育出3在此之后展开流式细胞核术(CD25反染)和细胞核因兄分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培育出。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE依赖性%-(b)。(c,d) CD25依赖性%-(c)和CD134依赖性%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中所的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们得出的事实是，来自减慢的发展兄的抑制知觉CD4+Treg在GITR隐含中所给与了扩展和比较丰富，合理化了全面性学术研究Treg在1HG心血管疾病不确定性生殖中所的遗传的重要性。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28